O projeto do genoma humano. Foi através deste projeto que, juntamente com o advento e o constante avanço das tecnologias de sequenciamento de nova geração, surgiu o que chamamos de “Era Pós Genômica”, onde em um curto tempo e por um preço acessível, é possível ter todo ou algumas partes do seu DNA sequenciado e, fácil acesso a diversos bancos de dados que disponibilizam centenas de mutações genéticas. Impulsionaram o desenvolvimento de novas metodologias de sequenciamento: com melhor qualidade, menor custo, maior rapidez e maior capacidade de geração de informações (high throughput/ alta demanda).
Atualmente existem diversas tecnologias voltadas para o sequenciamento do DNA em larga escala, sendo a Roche foi a primeira empresa a desenvolver esta estratégia que se baseia na tecnologia de pirosequenciamento (Plataforma454):
NGS 454
Tem um baixo custo, comparado a outros métodos existentes, e dispensa a clonagem e, comparado ao método de sequenciamento padrão de Sanger, seu sistema de sequenciamento é 100 vezes mais rápido;
Método que pode ser dividido em três etapas:
- Preparo da amostra (Na primeira etapa, o DNA é fragmentado aleatoriamente por nebulização, sendo selecionados os fragmentos com tamanho adequado);
- PCR em emulsão;
- Sequenciamento.
PLATAFORMA 454
O que mudou da 3° para 4° geração?
Agora, a etapa de amplificação não existe mais, além disso, é possível perceber uma maior sensibilidade na leitura dessa técnica.
Exemplo: Ion Torrent(Life Technologies®).
ION TORRENT
É uma técnica supersensível, pois consegue detectar variação do pH direto na placa. Vários segmentos de DNA são dispostos em um chip contendo um sensor que detecta a variação e a polimerase.
Um tipo de nucleotídeo (A,T,C ou G) é fornecido por vez ao chip. Se o segmento de DNA possui determinado nucleotídeo em sua sequência, nessa posição, ele será incorporado e a mudança de pH será detectada. Assim é possível saber qual nucleotídeo foi adicionado.
Ciclos de fornecimento de A,T,C e G são constantemente repetidos até que todos os segmentos tenham suas fitas complementares formadas e a sequência obtida. Detecção direta - método de sequenciamento bastante rápido.
"Com o sequenciamento de DNA no espaço, astronautas poderiam diagnosticar doenças. ou identificar o crescimento de microrganismos na Estação EspaciaI Internacional e determinar se represem riscos à saúde."
"Uma estação de sequenciamento de DNA espacial poderia ser uma importante ferramenta para auxiliar na proteção da saúde dos astronautas durante as missões à Marte, além de identificar potenciais formas de vida fora da Terra"
SEQUENCIAMENTO FASTA
